SAĞLAMLIQ

EKSPERİMENTAL ŞƏKƏRLİ DIABET ZMANI ATORVASTATİNİN LİMFOTROP TƏSİRİ

02-03-2017

Диабетическая нефропатия (ДН) представляет собой специфическое поражение при сахарном диабете (СД), сопровождающееся формированием узелкового  или диффузного гломерулосклероза, приводящее к потере фильтрационной и азотовыделительной функции почек и смерти больных от терминальной  почечной недостаточности [8, 10, 11]. Она является наиболее частой причиной развития терминальной стадии хронической болезни почек и развивается у 40–45% пациентов с  СД [2, 3, 11] . Более того в ряде эконо-мически развитых стран ДН вышла на первое место по потребности в заместительных видах терапии почечной недостаточности (гемодиализ или трансплантация почки), оставляя на второе - третье места первично-почечные заболевания любой этиологии [8, 13].

Появление клинических признаков поражения почек означает наступление грубых и необратимых изменений в структуре нефрона и интерстиции, а также свидетельствует об относительно малой эффективности терапевтических мероприятий [5, 14].

Для предотвращения ДН, необходимо своевременные профилактика и лечение. В течение последних двух десятилетий накоплен большой научный опыт, позволивший с новых позиций осветить патофизиологические  механизмы развития осложнений у больных сахарным диабетом и проводить  патогенетически обоснованную коррекцию выявленных нарушений. В частности стало известно, что наряду с гипергликемией гиперлипидемия выступает как патологический фактор в развитии диабетического поражения почек [6, 7, 9, 12]. Как и при атеросклерозе в этом важную роль отводят модифицированным липопротеидам низкой плотности (ЛНП), которые проникают через повреждённый эндотелий капилляров почечных клубочков и способствуют развитию в них склеротических процессов. Следует отметить, что все эти исследования проводилось в основном в кровеносном русле. При этом лимфатическая система оставалась в тени. Подобное состояние проблемы и представляемые пути ее решения определила направленность настоящего исследования.

Материал и методы исследования.Опыты проводились на 35 кроликах, обоего пола, породы «Шиншилла», весом 2,2-3,0 кг. Экспериментальную модель сахарного диабета воспроизводили путем одно-кратного подкожного введения аллоксана моногидрата (Sigma, США) в дозе 150 мг/кг в виде 5% водного раствора, после предварительной 24-часовой голодной диеты (при свободном доступе воды). Для уменьшения гибели животных вследствие гипогликемического шока кролики после индукции диабета вместо воды получали 5%-ый раствор глюкозы.  После введения аллоксана в 25% животных развивалось крайне тяжелое состояние с гипергликемией выше 30 ммоль/л, поэтому они были выведены из эксперимента на 5-е сутки. В эксперименте использовали животных с сахарным диабетом средней тяжести (с уровнем глюкозы крови натощак от 10 до 20 ммоль/л).

Все животные разделили на две группы. У 17 кроликов контрольной группы после моделирования аллоксанового СД проводили только сахароснижающую терапию, а у 18 кроликов опытной группы после моделирования аллоксанового СД в комплекс сахароснижающей терапии включали аторвастатин. Терапия аторваститином проводилась в течение 2 месяцев, доза которого составляла 10мг/кг в сутки.

Для анализов кровь брали из ушной вены кролика, а лимфу из дренированного грудного протока по методу А.А.Корниенко и др. [4] с модификацией М.Х.Əliyev, В.Q.Məmmədov [1]. При этом в качестве наркозного средства использовали растворы калипсола (8 мг/кг) и димедрола (0,15 мг/кг 1%-го раствора), которые вводили в ушную вену кролика. Забор крови и лимфы для анализов осуществляли на 5-е, 15-е, 30-е, 60-е и 90-е сутки после введения аллоксана. Для оценки нарушения липидного обмена в лимфе определяли содержание общего холестерина (ХС), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП), холестерина липопротеинов очень низкой плотности (ХС-ЛПОНП) и триглицеридов (ТГ) на биохимическом анализаторе BioScreen MS-2000 (Германия).  Скорость лимфооттока (СЛО) оценивали по объему лимфы, оттекающей из дренированного грудного протока в единицу времени. При статистической обработке результатов эксперимента применяли непара-метрические и параметрические методы анализа; данные обрабатывались при помощи пакетов программ EXCEL и Statistika по Стьюденту-Фишеру и методом Вилкоксона. 

Результаты исследования и их обсуждение.Исследования липид-ного состава лимфы, полученного из дренированного грудного протока показали, что липидный спектр лимфы при моделировании аллоксанового СД у кроликов (таблица 1) подвергается весьма значительному изменению. Так, уже через 5 суток исследования содержания Х- ЛПНП и Х-ЛПОНП заметно возрастали, превышая нормы на 28,3% и на 46,1%, соответственно (р< 0,01-0,001). Такая динамика изменений содержании Х- ЛПНП и Х-ЛПОНП сохранялась в течение 2-х месяцев. За указанный период исследования эти показатели возрастали до максимальных значений (превышали соответствую-щие исходные уровни более, чем 2,2 раза и на 87,2%, р< 0,001). В последующем периоде исследования обоих показателей, по сравнению с предыдущим периодом исследования, незначительно снижались. При этом содержание ОХ и ТГ сначала (через 5 суток исследования) имели тенденцию к повышению. А в последующие периоды (через 15 и 30 сутки) исследования возрастали, превышая исходные показатели на 11,6% и на 11,0%, соответственно (р< 0,05). В дальнейшем (через 30 суток исследования) содержание ОХ уменьшалось до нормы, а через 3 месяца исследования оно снова возрастало, достигая до 112,1% от исходного (р< 0,05). Однако содержание ТГ в лимфе по мере увеличение срока исследования неуклонно возрастало и в течение 3-х месяцев достигало до 123,8% от исходного (р< 0,01). Содержание Х-ЛПВП наиболее выраженным изменениям подвергалось только 15-й суток после введение аллоксана -  по сравнению с нормой, уменьшалось на 14,7% (р< 0,05). Такая динамика сохранялась в течение 2-х месяцев исследования. При этом оно максимально снижалось, составляя 46,6% исходной величины (р< 0,001).

Таблица  №1

 

Показатели  липидного обмена в лимфе при экспериментальном сахарном диабете у кроликов (М±m; n=17)

Показатели	Исходное состояние	Сроки   после   введение   аллоксана   (сутки)
		5	15	30	60	90
n	7	7	6	5	5	5
ХС (ммоль/л)	1,98±0,03	2,11±0,05	2,17±0,03	2,21±0,04*	2,16±0,04	2,22±0,04*
Х-ЛПВП (ммоль/л)	0,75±0,04	0,74±0,03	0,64±0,05*	0,41±0,04***	0,35±0,04***	0,41±0,03***
Х-ЛПНП (ммоль/л)	0,53±0,02	0,68±0,03*	0,93±0,05**	1,12±0,04***	1,2±0,03***	1,27±0,04***
Х-ЛПОНП (ммоль/л)	0,39±0,03	0,57±0,04**	0,61±0,03***	0,69±0,04***	0,73±0,05	0,71±0,04
ТГ (ммоль/л)	1,30±0,05	1,39±0,04	1,36±0,05	1,43±0,04	1,58±0,04	1,61±0,03
СЛО (мл.мин/кг)	0,22±0,02	0,20±0,02	0,18±0,03	0,16±0,03	0,16±0,04	0,14±0,03

Примечание: статистически  значимая разница с исходными показателями: * – p<0,05;  ** – p<0,01;  *** – p<0,001

 

Исследование СЛО из грудного протока показали, что моделирование сахарного диабета отрицательно влияет на лимфатический дренаж тканей у кроликов. Это выражалось в неуклонном уменьшении СЛО из грудного протока в течение всего опыта. К концу исследования она уменьшалась до 63,6% от исходной величины (р< 0,001). 

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетель-ствуют о том, что моделирование сахарного диабета осложняется с развитием дислипидемии, которая проявляется в виде повышения уровня ХС, ТГ, Х-ЛПНП и Х-ЛПОНП на фоне уменьшении содержании Х-ЛПВП как в крови, так и в лимфе на фоне весьма значительной уменьшении СЛО из грудного протока. Последнее свидетельствует об активном включении лимфатической системы в механизм развития дислипидемии при сахарном диабете, способствуя накоплению в тканях, в том числе и в ткани почек продуктов нарушенного метаболизма, создавая тем самым благоприятное условия для нефротоксического действия дислипидемии.

Результаты применение аторвастатина в комплексной лечении экспери-ментального СД у кроликов представлены в таблице 2. Как видно из нее введение аторвастатина способствует к значительному изменению липидного состава лимфы из дренированного грудного протока. Хотя, эти изменения по сравнению с соответствующими исходными показателями были незначительными. Так, заметное снижения содержания ОХ фиксировали через15 суток (уменьшалось до 85,8% от исходного, р<0,05), Х-ЛПВП – через 30 суток (уменьшалось до 88,0 от исходного, р<0,05), Х-ЛПНП – через 90 дней исследования (уменьшалось до 83,0% от исходного, р<0,05). При этом содержания Х-ЛПНП и Х-ЛПОНП незначительно увеличивались, соответственно на 12,8% (через 60 суток исследования, р<0,05) и на 28,2% (через 90 суток исследования, р<0,05). К значительным изменениям подвергались также СЛО из грудного лимфатического протока. Заметные изменения СЛО из грудного протока фиксировали через 15 суток после введения аллоксана, она уменьшалась до 81,8% от исходного (р<0,05). Такая динамика сохранялась и в дальнейшем, СЛО из грудного протока до конца исследования (в течение 90 суток) снижалась до 63,6% от исходного (р<0,001).

Таблица  №2

Влияние липидного обмена в лимфе при аллоксановом сахарном диабете у кроликов (М±m; n=18)

Показатели	Исходное состояние	Сроки   после   введение   аллоксана   (сутки)
		5	15	30	60	90
n	7	7	6	5	5	5
ХС (ммоль/л)	1,98±0,03	2,20±0,09	1,70±0,07***	1,82±0,05*	1,89±0,06*	1,80±0,07**
Х-ЛПВП (ммоль/л)	0,75±0,04	0,77±0,05	0,70±0,07	0,66±0,05***	0,69±0,07***	0,73±0,08***
Х-ЛПНП (ммоль/л)	0,53±0,02	0,63±0,05*	0,56±0,04**	0,50±0,07***	0,60±0,05***	0,44±0,06***
Х-ЛПОНП (ммоль/л)	0,39±0,03	0,56±0,05**	0,40±0,06**	0,36±0,04***	0,44±0,03***	0,50±0,05***
ТГ (ммоль/л)	1,30±0,05	1,31±0,04	1,26±0,06	1,20±0,08*	1,25±0,07**	1,34±0,09*
СЛО (мл.мин/кг)	0,22±0,02	0,21±0,01	0,17±0,02**	0,19±0,01*	0,21±0,03**	0,23±0,04***

Примечание: статистически значимая разница с контрольными показателями: ⋆- р<0,05;⋆⋆ - p< 0,01;   ⋆⋆⋆ - p< 0,001.

         Таким образом, результаты исследования у животных контрольной группы показали, что моделирование аллоксанового СД способствует к значительному изменению липидного состава лимфы, на фоне угнетения лимфатического дренажа тканей. Сопоставляя данные настоящего исследования с литературными можно заключить, что лимфатическая система весьма активно вовлекается в патогенез сахарного диабета. Учитывая все это у животных опытной группы в комплекс сахароснижающей терапии включали аторвастатин.

        Результаты исследования (таблица 2) показали, что применение аторвастатина благоприятно действует не только на липидный состав крови (как это свидетельствует литературные данные), но и на липидный состав лимфы, проявляя весьма выраженный липфотропный эффект. Так, нормализующий эффект аторвастатина в лимфе фиксировали через 15 суток исследования – содержание ОХ по сравнению с исходным уровнем снижалось до 85,8%, а по сравнению с аналогичным периодам контрольных показателей, еще больше – до 78,4% (р<0,01). В указанный период исследования показатели Х-ЛПВП, Х-ЛПНП, Х-ЛПОНП и ТГ нормализовались, а по сравнению с соответствующими контрольными показателями уменьшались содержание только Х-ЛПНП и X-ЛПОНП на 39,8% и на 34,4%, соответственно (р<0,01-0,001). Такая динамика изменений в липидном составе лимфы сохранялась в течение всего опыта. Выявлено достоверное уменьшение уровня атерогенных липидов, таких, как общего ХС (р < 0,001), Х- ЛПНП (р < 0,001), Х- ЛПОНП (р < 0,001) и ТГ (р < 0,05). Отмечена тенденция к увеличению содержания Х- ЛПВП с 0,35 ± 0,04 до 0,73 ± 0,08 ммоль/л (р > 0,001). Исследования СЛО из грудного протока у данной группы животных показали, что применение аторвастатина заметно улучшило лимфатический дренаж тканей. Хотя, в течение месяца исследования СЛО из грудного протока существенно не отличалась от исходных значений, а в последующие периоды исследования она возрастала до пределах исходного показателя и превышала (на 31,2% и на 64,3%) соответствующие показатели контрольных животных (р<0,05 - 0,001). Таким образом, результаты настоящего исследования показали, что аторвастатин обладает весьма выраженным лимфотропным эффектом. Об этом свидетельствут улучшения исходно нарушенных показателей липидотранспортной системы лимфы и лимфатического дренажа тканей. Последнее, усиливая выведение из интерстиции токсичных продуктов из тканей, в частности из почек, создает благоприятное условие для саногенетических процессов. 

ƏDƏBİYYAT - ЛИТЕРАТУРА– REFERENCES:

1.Əliyev M.X., Məmmədov V.Q. Xroniki eksperimentdə adadovşanlarında mərkəzi limfanın alınması üsulu// Azərbaycan Tibb jurnalı, 1990, №11, с.48–50
2.Бондарь И.А., Климонтов В.В. Почки при сахарном диабете: патоморфология, патогенез, ранняя диагностика, лечение. Новосибирск: Издательство НГТУ, 2008;73–75
3.Дедов, И.И. Диабетическая нефропатия Текст. / И. И. Дедов, М. В. Шестакова. М., 2000. - 239 с.
4.Корниенко А.А., Куликовский Н.Н., Сорокатый А.Е. Катетеризация грудного протока в эксперименте. В кн.: Актуальные вопросы топографичекой анатомии и оперативной хирургии. М.: 1977, вп.1, с.22-26
5.Лебедева Н.О., Викулова О.К. Маркеры доклинической диагностики диабетической нефропатии у пациентов с сахарным диабетом 1 типа. // Сахарный диабет, 2012, №2, с.38–45
6.Нгуен Зань Хань. Липидный обмен при сахарном диабете и его осложнениях. Дисс. к.м.н., Москва, 2015,  143с.
7.Самойлова Ю.Г., Юрченко Е.В. Особенности липидного обмена у пациентов с сахарным диабетом 1-го типа в зависимости от наличия диабетических микроангиопатий и характера питания// Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 87-92 87
8.Шестакова М.В., Шамхалова М.Ш., Ярек-Мартынова И.Я. и др. Сахарный диабет и хроническая болезнь почек: достижения, нерешенные проблемы и перспективы лечения// Сахарный диабет, 2011, №1, с.81–88
9.Cechowka-Pasko, M. Decreased biosynthesis of glycosaminoglycans in the skin of rats with chronic diabetes mellitus// Exp. Toxicol. Pathol. 1999, Vol.51, №3, р.239-243
10.Donnelly R. Horton E.Vascular complications of diabetes  Blackwell Publishing, USA, 2005, P.233
11.Feld LG., Barratt T.M., Avner E.D. Diabetic nephropathy// Pediatric nephrology /Baltimore : Lipincott Williams&Wilkins, 2004. P. 931-939
12.Hovind, P., Tarnow L., Rossing P. Improved survival in patients obtaining remission of nephritic range albuminuria in diabetic nephropathy// Kidney Int. 2004, Vol.66, рр.1180-1186.
13.Mogencen, C.E., Soiling K., Vittinghus E. Studies on mechanism of proteinuria using aminoacid-induced ingibition of tubular reabsorption in normal and diabetic man// Contr. Nephrol., 2000, Vol.26, р.50-65
14.Radbill B., Murphy B., LeRoith D. Rationale and strategies for early detection and management of diabetic kidney disease // Mayo Clin. Proc. 2008. Vol. 83. № 12. P. 1373–1381.