BRONXIAL ASTMALI UŞAQLARDA LOKAL VƏ SISTEM IMMUNITETININ ƏSAS GÖSTƏRICILƏRININ KLINIKI-DIAGNOTIK ƏHƏMIYYƏTI

10-04-2009

Бронхиальная астма (БА) является одним из самых распространенных заболеваний детского возраста. Известно, что в основе патогенеза БА важное значение имеют иммунологические механизмы. В отличие от системных изменений, исследованию которых посвящено много работ, особенностям местного иммунитета при БА уделяется гораздо меньше внимания исследователей [1]. В то же время патогенетически значимые отклонения происходят именно на топическом уровне.

В небольшом числе публикаций отмечено, что местный иммунитет ротовой полости взаимосвязан с глубиной патологии на местном органном уровне [2]. В отличие от хорошо изученной сыворотки крови, состав слюны стал предметом рассмотрения только в последние годы. Исследователями показана высокая информативность и обоснована перспективность изучения секреторного иммунитета для целей экологического мониторинга здоровья детей [3]. 

В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы было: изучить клинико-диагностические особенности  основных показателей системного и локального иммунитета у детей с бронхиальной астмой. 

Материалы и методы: Под нашим наблюдением находилось 153 ребенка, из них 83 ребенка с БА, 50 детей с РБ и 20 практически здоровых ребенка в возрасте от 4 до 15 лет, которые были включены в исследование методом случайного выбора.

Исследования проводились в периоде ремиссии заболеваний на базе кафедры педиатрии АзГИУВ им. А.Алиева, детских городских поликлиник № 2, 5, 10, 13 г.Баку и медицинского центра «Евромед» в период с 2006 по 2009 гг.

Для исследования показателей иммунной системы использована кровь и слюна, взятые у детей натощак, не ранее чем через 1 месяц после окончания любого инфекционного процесса или ревакцинации. В крови и слюне определены следующие показатели: уровни иммуноглобулинов (sIgA, IgA, IgE, IgG, IgM), ЦИК, зрелые (CD3) Т-лимфоциты, хелперные (CD4), супрессорные Т-лимфоциты (цитотоксические CD8), количество В-клеток (СD19), NK-лимфоциты (CD56), активированные лимфоциты - апоптоз клеток (CD95). Использовали методику, прилагаемую к данной панели моноклональных антител. Микроскопию проводили на микроскопе фирмы «Люмам РI». Определение уровня IgE  в смешанной слюне проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью набора «Е-ИФА- Бест стрип» на аппарате Bio Screen MS-500.

Результаты и обсуждение: С целью изучения интенсивности иммунных реакций у детей были проанализированы показатели клеточного и гуморального иммунитета для каждой группы обследуемых. В таблице 1 приведены данные сравнительного анализа показателей Т-клеточного звена иммунного статуса у детей с БА и РБ по сравнению с группой контроля. При анализе показателей иммунного статуса больных БА и рб установлены изменения в фенотипе Т-клеток в сравнении с группой здоровых детей.

Так, общее число Т-лимфоцитов (СD3) было значительно снижено (55±9,4; р < 0,05), в группе детей с БА, что отражает дефицит Т-клеточных механизмов защиты, осуществляющими иммунологический надзор за антигенным гомеостазом в организме. Подсчет относительного числа Т-хелперов (СD4) показал также (38±7,97; р < 0,05) снижение данной субпопуляции Т-лимфоцитов у детей с БА. Анализ уровня Т-супрессоров (СD8) выявил тенденцию к их незначительному снижению (28,6±8,96; р>0,05) хотя разница оказалась не достоверной.

 

Таблица 1

Показатели Т-клеточного звена иммунного статуса в периферической крови

у  детей с БА и РБ

Показатели (%)	БА (n=83)	РБ (n=34)	Здоровые дети (n=20)
СD3	55±9,4*	59±3,4	62,5±5,1
СD4	38±7,97*	40,44±5,81*	42,5±9,3
СD8	28,6±8,96	30,06±6,59	30,75±8,0
СD4/ СD8	1,32±0,38	1,36±0,05	1,38±0,13
СD56	24,5±9,29*	10,75±7,69*	19,33±8,02

Примечание: * - р < 0,05

 

Количество недифференцированных «нулевых» лимфоцитов (СД56) у детей с БА превышало аналогичные значения в группе контроля (24,5±9,29 против 19,33±8,02; р<0,05). Повышение данного показателя свидетельствует о напряженности противовирусного иммунитета у детей с БА. В то время  как в группе детей с РБ данный показатель оказался значительно сниженным (10,75±7,69; p<0,05), что может свидетельствовать о недостаточности противовирусного иммунитета.

При исследовании гуморальных факторов иммунного статуса у детей с БА были выявлены некоторые отклонения по сравнению с контрольной группой (см.табл. 2).

 

Таблица 2

Показатели гуморального звена иммунитета и ЦИК в периферической крови у 

 детей с БА и РБ

Показатели (%)	БА (n=83)	РБ (n=34 )	Здоровые дети (n=20)
СD19	26,33±7,09	24,8±5,7	24,3±6,7
IgA(g/l)	1,91 ±1,11*	1,5±0,45	1,4±0,25
IgM(g/l)	0,97±0,1	1,21±1,85	1,27±1,48
IgG(g/l)	10,2±1,06	12,2±2,71	13,2±1,07
IgЕ(g/l)	369,64±180,5*	65,2±37,6	35,2±5,6
ЦИК	66,6±16,8*	48,25±19,4	41,25±16,8

Примечание: * - р < 0,05

Как видно из таблицы, количество В-лимфоцитов (СД19) у больных несколько превышало соответствующий показатель в контроле (26,33±7,09 против 24,3±6,7; р > 0,05).

Важное значение в оценке гуморального иммунитета имеет соотношение популяций в общем пуле В-лимфоцитов. У обследуемых детей была установлена дисиммуноглобулинемия: снижение IgM и IgG и повышение IgA. повышение содержания IgA на фоне сниженных показателей Т-звена иммунитета, вероятно, является компенсаторным, отражая поликлониальную активацию В-системы иммунитета.  У больных с БА также отмечалось возрастание количества ЦИК (66,6±16,8 против 41,25±16,8; р < 0,05).

Типичным для детей с БА была тенденция к снижению показателей Т-клеточного звена иммунитета за счет угнетения показателей: CD3-71%; CD4-64%; CD8-34%; СD56-56%; СD95-69% больных. Снижение количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций характеризовало недостаточность клеточного звена иммунитета и уменьшение резистентности организма  к вирусной инфекции. При этом В-лимфоциты (СD19) у 37% детей с БА имели тенденцию к повышению. По показателям гуморального иммунного ответа группы детей с РБ достоверно не отличались от контрольной группы. Проведенный корреляционный анализ между уровнем СD95 и лимфоцитами периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56) приведен в таблице 3.

Слабые корреляционные зависимости между лимфоцитами крови и уровнем СD95 маркера апоптоза у детей с БА по сравнению с детьми с РБ  могут быть связаны как с присоединением сенсибилизации к пищевым, бытовым и эпидермальным аллергенам, так и с включением разных механизмов апоптоза. Полученный факт подтверждает существующее мнение об отсутствии единых механизмов запуска апоптоза при развитии заболеваний разных нозологических групп [1,5].

Таблица 3

Коэффициент корреляции между уровнем СD95-маркером апоптоза и лимфоцитами периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56)

 

Показатель	СD95
	БА	РБ
СD3	0,3	-0,45
СD4	0,12	- 0,16
СD8	0,26	0,45
СD19	- 0,09	0,9
СD56	0,46	0,51

Для изучения интенсивности иммунных реакций на местном уровне все дети с БА были подразделены на 2 группы: первая группа с уровнем IgE>100 IU/ml; вторая группа с уровнем IgE

Как видно из таблицы, все показатели Т-клеточного иммунитета имели положительную зависимостью.  При этом наиболее значимые положительные связи были обнаружены между показателями СД3 и СД8 (ρ=+0,54 и ρ=+0,59; р<0,001).

При исследовании гуморального иммунитета в крови и слюне показатели В-клеток (СД19) имели отрицательную корреляцию (-0,31). Однако при сравнении показателей иммуноглобулинов были обнаружены разной силы положительные связи. Наиболее информативным показателем с высоким уровнем корреляции (ρ=+0,87; р<0,001) оказался IgE, что подтверждает целесообразность его определения в слюне детей с БА. Наши данные подтверждают общепризнанное мнение, что IgE обладает способностью к быстрой фиксации на клетках слизистых оболочек, поэтому в свободном виде присутствует в плазме крови в ничтожных количествах [4,5]. Между показателями сывороточного и секреторного IgA была обнаружена средней силы положительная связь (ρ=+0,31; р<0,001). Как известно [5], локальный синтез  IgA обуславливает местный иммунитет, осуществляя тем самым защиту слизистых оболочек от патогенных микроорганизмов и потенциальных аллергенов. Содержание ЦИК в крови и слюне имело обратную зависимость средней силы (ρ=-0,42; р<0,001).

Таблица 4

Показатели клеточного иммунитета в периферической крови и слюне  детей с БА и их корреляция

Показатели	В крови (n=83)	В слюне (n=83)	Уровень корреляции
СД3	55±9,4	3,63±0,74	+0,54
СД4	38±7,97	2,63±1,18	+0,33
СД8	28,6±8,96	2,0±1,06	+0,59
СD4/ СD8	1,32±0,38	1,31±0,23	--
СД56	24,5±9,29	2,0±1,19	+0,36

 

Таблица 5

Показатели гуморального иммунитета и ЦИК в периферической крови и слюне детей с БА

Показатели	В крови (n=83)	В слюне (n=83)	Уровень корреляции
СД19	26,33±7,09	1,75±0,7	-0,31
IgA(g/l)	1,91 ±1,11	0,39±0,2	+0,31
IgM(g/l)	0,97±0,1	1,49±0,83	+0,06
IgG(g/l)	10,2±1,06	2,3±0,48	+0,25
IgE(g/l)	369,64±180,5	1,05±0,4	+0,87
ЦИК (ед.опт.пл.)	66,6±16,8	11,64±9,6	-0,42

Состояние локального иммунного статуса оценивалось также по результатам исследования клеточного и гуморального иммунитета индексной оценкой: СД3/СД19; СД3/СД4; СД3/СД8; СД4/СД8; IgG/CД19; IgA/CД19; IgE/CД19; IgG/IgA; IgA/IgM; IgG/IgM; IgE/IgG; IgG/ ЦИК; IgA/ ЦИК; IgM/ ЦИК; IgE/ ЦИК (см. табл. 6 и 7).

Таблица 6

 

Индексная оценка клеточного иммунитета в обследуемых группах детей с IgE- позитивным и IgE- негативным ответом

Группы больных	IgE>100 (n=63)	IgЕ<100 (n=20)
СД3/СД19	2,4	2,3
СД3/СД4	1,4	2,7
СД3/СД8	2,7	2,1
СД4/СД8	1,9	0,9
Сумма	8,4	8,0

 

Как видно из данных таблиц, в первой группе больных отмечалось сниже-ние локальных клеточных параметров (суммарная индексная оценка составляла 8,4) относительно гуморальных индексных показателей (суммарная индексная оценка – 10,7). Во второй группе больных такой разницы не отмечалось (индексная оценка клеточных факторов – 8,0, а гуморальных- 7,9). Создается впечатление, что у больных второй группы не наблюдается дисбаланса между клеточными и гуморальными факторами иммунитета. У больных первой группы отмечается напряженность гуморальных иммунных реакций, что выражается высокой индексной оценкой – 10,7. Чтобы исключить влияние высоких значений IgE в группе больных с IgE – позитивным ответом из суммарной оценки исключили индексы, связанные с IgE. Полученные данные составили для первой группы 8,8, а для второй – 7,2, т.е. статистические данные отражали активность гуморальных реакций в первой группе обследуемых детей.

При повышении содержания в периферической крови уровня общего IgE происходило уменьшение уровня СD95 клеток. Во II группе пациентов установлено (р<0,01) снижение количества СД95 клеток и уровня экспрессии на них Fas- рецептора (31,9±3,2%) относительно детей I группы (57,7±8,42%).

 

Таблица 7

 

Индексная оценка гуморального иммунитета в обследуемых группах детей с IgE- позитивным и IgE- негативным ответом

 

Группы больных	IgE>100 (n=63)	IgЕ< 100 (n=20)
IgG/CД19	0,7	1,5
IgА/CД19	0,3	0,3
IgМ/CД19	0,04	0,1
IgЕ/CД19	0,8	0,5
IgG/IgA	7,1	4,1
IgА/IgМ	0,4	0,1
IgG/IgМ	0	0,8
IgЕ/IgG	0,9	0,2
IgG/ ЦИК	0,2	0,2
IgА/ ЦИК	0,05	0,05
IgМ/ ЦИК	0	0
IgЕ/ ЦИК	0,2	0,06
Сумма	10,7	7,9

Возможно, это отражает процессы регуляции экспрессии Fas- рецептора со стороны цитокинов, продуцируемых Th2, что блокирует передачу сигналов апоптоза в клетки, в том числе и IgE- продуцирующие, и влечет за собой поддержание продукции IgE.  Результаты корреляционного анализа лимфоцитов периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56) и СD95- маркера апоптоза у детей с БА в зависимости от уровня  общего IgE представлены в таблице 8.

В отличие от I группы, во II группе больных выявлены положительные средние и сильные корреляционные связи между уровнем СD95 и лимфоцитами крови. Выявленная отрицательная корреляционная зависимость в обеих группах больных между концентрациями СD95 маркера апоптоза и IgE, может свидетельствовать об участии системы апоптоза в регуляции продукции общего IgE, происходящего в результате большей продолжительности жизни клеток, его образующих.

Таблица 8

Коэффициент корреляции лимфоцитов периферической крови и СD95- маркера апоптоза у детей с БА в зависимости от уровня  общего IgE

Показатель	CD95
	IgE	IgE>100 МЕ/мл
CD 3 CD4 CD8 CD19 CD56 IgE	0,18 -0,2 -0,28 0.45 0,37 -0,64	0,54 0,76 0,43 0,4 0,78 -0,8

Выводы:

1.Сравнительный анализ пока-зателей гуморального и клеточного иммунитета в крови и слюне выявил наиболее значимые положи-тельные связи между показателями СД3 и СД8 (ρ=+0,54 и ρ=+0,59; р<0,001); уровнем  IgE (ρ=+0,87; р<0,001); между показателями сывороточного и секреторного IgA (ρ=+0,31; р<0,001); содержание ЦИК в крови и слюне имело обратную зависимость средней силы (ρ=-0,42; р<0,001). У детей с БА определение уровня IgE в секрете ротовой полости может быть использовано в качестве неинвазивного способа иммунологического обследования у детей различных возрастов.

2.В группе пациентов с БА ((46,0±21,8), р<0,01)) и  при сочетании БА и АД ((32,6±18,6), р<0,0001)) наблюдается достоверное снижение уровня СD95-маркера апоптоза лимфоцитов в сыворотке крови по сравнению с контролем (59,8±9,6).У детей с РБ существенных отличий от контрольной группы по указанному показателю не выявлено ((56,7±8,0) и (59,8±9,6) соответственно). При этом обнаружена отрицательная корреляционная зависимость (ρ=-0,8) между концентрациями СD95- маркера апоптоза и IgE, что может свидетельствовать об участии системы апоптоза в регуляции продукции общего IgE. С целью дифференциальной диагностики БА и РБ наряду с анализом клинико-анамнестических данных и аллергологическим обследованием целесообразно определение   показателя уровня СД95-маркера апоп-тоза лимфоцитов в сыворотке крови.

 

ƏDƏBİYYAT - ЛИТЕРАТУРА – REFERENCES:

 

1. Абаджиди М. А., Лукушкина Е. Ф.и др. Уровень цитокинов в секрете ротовой полости у детей с бронхиальной астмой. Цитокины и воспаление,  2002, № 3; с.15-19.

2. Богданова А.В., Бойцова Е.В. и др. Особенности местного воспаления при тяжелой бронхиальной астме и хроническом бронхиолите у детей. Педиатрия,  2005, № 4, с.8-11. 

3. Комарова Л.Г.,Алексеева О.П. Саливалогия – М.: Изд-во НГМА Нижний Новгород, 2006. -177с.

4. Медведева Л.В. Анализ показателей секреторного иммунитета у здоровых и склонных к бронхоспазму детей. Актуальные проблемы пульмонологии на Урале; Мат.IV Конгресса пульмонологов Уральского Федерального округа. г. Челябинск, 2004г. С. 41- 45.

5. Мельников О.Ф., Заболотный Д.И. Диагностика иммунодефицитов при патологии слизистой оболочки на основе определения иммуноглобулинов в секретах. – К.: Институт оториноларингологии им. Коломийченко АМН Украины, 2003. – 31 с.